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Análise da dieta de morcegos insetívoros em ambientes cavernícolas através de metabarcoding de eDNA

(2019-02-21) JORDÃO, ANA CLÁUDIA DA SILVA JARDELINO; Bernard, Enrico; Oliveira, Guilherme; Torres, Rodrigo Augusto; Aburjaile, Flávia Figueira; Oliveira, Hernani Fernandes Magalhães de; Nunes, Pedro Murilo Sales; Neto, José Ribamar Costa Ferreira

Os morcegos insetívoros são apontadoscomo principais consumidores noturnos de insetos, incluindo espécies consideradas pragas agrícolas e vetores de doenças para humanos. Entretanto, amaioria das identificações dos artrópodes consumidos por morcegos é realizada através da observação direta dassuasfezes e/ou do conteúdo estomacal, dificultando a identificação específica das presas. Recentemente, técnicas moleculares não invasivas,como metabarcoding atrelado ao sequenciamento de alto rendimento, ampliaram a capacidade quali-quantitativa de identificação de itens alimentares em amostras fecais não apenas de morcegos, mas de vários outros organismos. Mediante este processo é possível realizar o sequenciamento simultâneo de milhões de genes extraídos de amostras de materiais conglomerados, comoo guano dos morcegos. Em uma abordagem pioneira para o Brasil, esta dissertação utilizou a técnica de metabarcoding para identificar e quantificar insetos presentes no guano de morcegos cavernícolas. Amostras de guano provenientes demorcegos insetívoros decavernas na Caatinga, na Mata Atlântica, e na Floresta Amazônica foram armazenadas em etanol 96%, em solução de estabilização RNA Laterou in naturae posteriormente congeladas em ultra freezer -80ºC, visando inicialmente o teste desses três métodos de estocagem de guano,dedois kits de extração de DNA e a padronização da amplificação, incluindo a escolha dos iniciadores para o gene mitocondrial Citocromo C Oxidase I. As sequências geradas foram agrupadas em unidades taxonômicas operacionais (OTUs). A coleta de guano em todas as cavidades resultou num total de 397 amostras. Deste total, 250 amostras foram selecionadas para a extração do DNA. Para os testes de estocagem, extração e amplificação do DNA foram selecionadas doze amostras. O método de armazenamento mais eficaz foi in natura, seguido daquele com adição de buffer e por último a adição de etanol 96%. Para os testes de amplificação com os três conjuntos de iniciadores foram selecionadas13 amostras. Após os testes com os iniciadores, o fragmento de 130 pb foi selecionado para o sequenciamento de 29 amostras. Neste sequenciamento foram geradas 13.636 OTUs.Destas, 1.117 OTUs (8,2%) possuem similaridade igual ou acima de 97% com o banco dedados de nucleotídeos do NCBI e 401OTUs (2,98%) são representativas para táxons de artrópodes com similaridade igual/acima de 97%. Lepidoptera e Dipteraforam as ordens mais frequentes nas amostras, incluindo ao menos 10 espécies consideradas como pragas agrícolas ouvetores de doenças.Ariqueza e diversidade de presas identificadas neste estudo confirmam a eficiência daabordagem molecular na identificação de itens alimentaresconsumidos por morcegos e o importante papel desempenhado por elesna supressão de artrópodese na prestação dos serviços ecossistêmicos, principalmente quando suprimem artrópodes que podem causar prejuízos à agricultura e outros que podem ser transmissores de doenças.